Habilidades e métodos de microscopia de fluorescência
Parâmetros técnicos do microscópio de fluorescência 1. Ocular grande angular 2. Lente objetiva acromática 3. Conversor de lente objetiva de quatro orifícios 4. Dispositivo de epifluorescência Sistema de excitação azul (B) Verde (G) 10Lâmpada de mercúrio 0W 5. Mecanismo de ajuste de foco grosso e fino coaxial: Ajuste Faixa de foco: 15 mm Valor da grade de micromovimento: 0,002 mm 6. Mesa mecânica de camada dupla Faixa de movimento longitudinal: 70 mm Faixa de movimento lateral: 50 mm
Parâmetros técnicos do microscópio de fluorescência
1. Ocular grande angular
2. Lente objetiva acromática
3. Revólver de quatro aberturas
4. Dispositivo de epifluorescência azul (B) sistema de excitação verde (G) lâmpada de mercúrio de 100W
5. Mecanismo de ajuste de foco grosso e fino coaxial: faixa de foco 15 mm valor da grade de movimento fino 0,002 mm
6. Bancada mecânica de camada dupla
Faixa de movimento vertical: 70 mm Faixa de movimento lateral: 50 mm
Habilidades e métodos de microscopia de fluorescência
(1) Lâmina de vidro
A espessura da lâmina de vidro deve estar entre 0,8 e 1,2 mm. Por um lado, uma lâmina muito espessa absorverá mais luz e, por outro lado, a luz de excitação não poderá ser concentrada na amostra. As lâminas devem ser lisas, uniformes em espessura e livres de autofluorescência óbvia. Às vezes, lâminas de vidro de quartzo são usadas.
(2) Cobertura de vidro
A espessura da tampa de vidro é de cerca de 0,17 mm, lisa. Para fortalecer a luz de excitação, também pode ser usado um vidro de cobertura de interferência, que é um vidro de cobertura especial revestido com várias camadas de substâncias (como fluoreto de magnésio) que têm diferentes efeitos de interferência na luz de diferentes comprimentos de onda, o que pode tornar o fluorescência ir sem problemas. A luz excitante é atravessada e refletida, e esta luz de excitação refletida excita o espécime.
(3) Amostra
Fatias de tecido ou outras amostras não devem ser muito grossas. Se for muito espesso, a maior parte da luz de excitação será consumida na parte inferior da amostra, enquanto a parte superior observada diretamente pela lente objetiva não será totalmente excitada. Além disso, a sobreposição de células ou a cobertura de impurezas afetam o julgamento.
(4) Agente de montagem
A glicerina é comumente usada como agente de montagem, que não deve ter autofluorescência, incolor e transparente, e o brilho da fluorescência é mais brilhante em pH 8.5-9.5, e não é fácil desbotar rapidamente. Portanto, uma mistura igual de glicerol e solução tampão de carbonato 0.5mol/l com um pH de 9.0 a 9,5 é comumente usada como agente de montagem.
(5) óleo de espelho
Geralmente, ao observar amostras com microscópios de fluorescência de campo escuro e lentes de imersão em óleo, deve-se usar óleo de imersão. É melhor usar óleo de imersão especial não fluorescente. A glicerina acima também pode ser usada, e a parafina líquida também pode ser usada, mas o índice de refração é baixo, o que tem um leve impacto na qualidade da imagem. Influência.
