Métodos e precauções de uso do microscópio de fluorescência
Método de uso:
(1) Coloque a folha de material na plataforma transportadora.
(2) Ligue o regulador de tensão do microscópio de fluorescência. Em seguida, pressione o grupo inicial para acender a lâmpada UV, não deve ser desligada por 15 minutos e não deve ser reiniciada por 3 minutos após ser desligada.
(3) Gire o filtro de excitação para v, filme dicróico para v, escolha filtro de bloqueio de 495 ou 475 nm.
(4) Escolha uvFL40, uvFL100 fluorescência recebendo microscopia de lente objetiva.
(5) Adicione óleo não fluorescente na lâmina, primeiro 40 x e depois 100 x para microscopia de foco. Mostrar fluorescência.
(7) Como o material fluorescente por irradiação ultravioleta com o crescimento da fluorescência enfraqueceu gradualmente ao longo do tempo, o exame microscópico deve mudar frequentemente o campo de visão.
(8) também pode usar material de microscopia de baixa ampliação uvFL10 ou uvFL20 (com baixa ampliação sem adição de óleo não fluorescente).
Método de gravação de imagem de fluorescência:
Imagem de fluorescência vista pelo microscópio de fluorescência, uma é com características morfológicas, a segunda é com a cor e brilho da fluorescência, no julgamento dos resultados os dois devem ser combinados com um julgamento abrangente. Os resultados são registrados segundo indicadores subjetivos, ou seja, por observação visual do trabalhador. Como observação qualitativa geral, basicamente confiável. Com o desenvolvimento da tecnologia e da ciência, em diversos graus, a utilização de indicadores objetivos para registrar os resultados do julgamento, como o uso de espectrofotômetro celular, analisador de imagens e outros instrumentos. Contudo, os resultados registados por estes instrumentos também devem ser combinados com um julgamento subjetivo.
A tecnologia de fotografia de microscópio de fluorescência é muito necessária para registrar imagens de fluorescência, porque a fluorescência é fácil de desbotar e enfraquecer, para registrar instantaneamente os resultados da fotografia. O método é basicamente igual à micrografia comum. Basta usar filme fotográfico de alta velocidade como ASA200 acima ou 24. acima. Porque a luz ultravioleta no efeito de explosão de fluorescência, como os marcadores FITC, na irradiação de luz ultravioleta 30s, o brilho da fluorescência foi reduzido em 50%. Portanto, a velocidade de exposição é muito lenta para capturar a imagem de fluorescência. Os microscópios de fluorescência de pesquisa geral possuem dispositivos de sistema de microfotografia semiautomáticos ou totalmente automáticos.
Precauções:
(1) Opere em estrita conformidade com os requisitos do manual de fábrica do microscópio de fluorescência, não altere o procedimento arbitrariamente.
(2) A inspeção deve ser realizada na câmara escura. Depois de entrar na câmara escura, conecte a fonte de alimentação, acenda a lâmpada de mercúrio de ultra-alta pressão por 5-15min, espere até que a fonte de luz emita uma luz forte para se estabilizar e os olhos estejam completamente adaptados à câmara escura, e então comece a observar a amostra.
(3) Para evitar danos aos olhos causados pela luz ultravioleta, óculos de proteção devem ser usados ao ajustar a fonte de luz.
(4) verifique o tempo de cada vez para 1 ~ 2h é apropriado, mais de 90min, a intensidade luminosa da lâmpada de mercúrio de ultra-alta pressão diminuiu gradualmente, a fluorescência enfraquecida; amostras irradiadas por luz ultravioleta 3 ~ 5min, a fluorescência também é significativamente enfraquecida; portanto, * não deve ser superior a 2 ~ 3h.
(5) a vida útil da fonte de luz do microscópio de fluorescência é limitada, a amostra deve ser inspecionada centralizada, a fim de economizar tempo e proteger a fonte de luz. Quando estiver quente, deve ser adicionado resfriamento por ventilador, nova lâmpada deve ser registrada desde o início do uso do tempo. Quando a lâmpada se apaga e deseja ser usada novamente, a lâmpada deve ser suficientemente resfriada antes de acender. A fonte de luz deve ser evitada várias vezes.
(6) Observe a amostra imediatamente após a coloração, pois a fluorescência diminuirá gradualmente com o tempo. Se a amostra for colocada em um saco plástico de polietileno armazenado a 4 graus, pode atrasar o enfraquecimento da fluorescência e evitar a evaporação do agente de vedação.
(7) Critérios de julgamento para brilho de fluorescência: geralmente dividido em quatro níveis, ou seja, 'um' - nenhuma fluorescência ou fluorescência fraca visível. '+' - apenas fluorescência visível clara. '+ +' - visível com um brilho
