Microscópio de fluorescência e diferenças e características do microscópio óptico comum
Microscópio de fluorescência e microscópio óptico comum são diferentes, não é através da iluminação da fonte de luz comum para observar a amostra, mas do uso de um certo comprimento de onda de luz (geralmente ultravioleta, luz azul-violeta) excitação de material fluorescente dentro da amostra sob o microscópio, de modo que a fluorescência da fonte de luz do microscópio de fluorescência não desempenha uma iluminação direta, mas como uma espécie de excitação do material fluorescente dentro da amostra da fonte de energia. A razão pela qual podemos observar a amostra não é devido à iluminação da fonte de luz, mas ao fenômeno de fluorescência apresentado pelo material fluorescente na amostra após absorver a energia luminosa de excitação. Pode-se observar que as características do microscópio de fluorescência, principalmente sua fonte de luz, podem fornecer um grande número de faixas específicas de comprimento de onda da luz de excitação, de modo que o material fluorescente dentro da amostra examinada possa obter a intensidade necessária da luz de excitação. Ao mesmo tempo, o microscópio de fluorescência deve ter um sistema de filtro correspondente. O microscópio de fluorescência é a ferramenta básica para histoquímica de fluorescência. É composto por fonte de luz de ultra-alta pressão, sistema de filtro (incluindo placa de filtro de excitação e supressão), sistema óptico e sistema fotográfico e outros componentes principais, é o uso de um determinado comprimento de onda de luz para estimular a amostra a emitir fluorescência.
1. a forma de excitação de fluorescência: de acordo com a faixa de comprimento de onda da luz é dividida em método de excitação UV (usando iluminação ultravioleta) e método de excitação BV (usando luz violeta azul) dois tipos de método de excitação UV são menores que 400nm perto da luz ultravioleta para excitação. Não há luz de excitação visível neste método, portanto a fluorescência observada mostra a fluorescência inerente do corante e é fácil distinguir a fluorescência específica na amostra da autofluorescência do tecido de fundo.
2. Método de excitação BV: O método é centrado em 404 nm, 434 nm de luz ultravioleta a azul para excitação. Este método utiliza luz azul para irradiar a amostra, portanto, o filtro de corte do sistema de observação de fluorescência deve usar um filtro que possa bloquear completamente a luz azul e possa passar adequadamente a fluorescência verde e amarela desejada. Pigmentos fluorescentes para o método de anticorpos fluorescentes. Como o comprimento de onda da absorção máxima da luz de excitação e o comprimento de onda da emissão máxima da fluorescência estão próximos um do outro, os filtros utilizados no método de excitação BV devem ser filtros de corte nítidos. Este método utiliza luz azul como luz de excitação, de modo que a eficiência de absorção do fluorocromo é maior e uma imagem mais brilhante pode ser obtida. A desvantagem é que a fluorescência abaixo de 500 nm não pode ser vista e acima de 500 nm a imagem inteira aparece amarela. No método de anticorpo fluorescente, a maior parte da especificidade é avaliada pela cor única do fluorocromo, pelo que as desvantagens do método de excitação BV descrito acima tendem a ser extremamente influentes quando se discute a especificidade subtil.
