Diferença entre microscópio de fluorescência e microscópio confocal a laser
microscópio fluorescente
1. O microscópio de fluorescência usa luz ultravioleta como fonte de luz, que é usada para irradiar o objeto detectado para fazê-lo emitir fluorescência e, em seguida, observar a forma e a posição do objeto sob o microscópio. O microscópio de fluorescência é usado para estudar a absorção, transporte, distribuição e localização de substâncias químicas nas células. Algumas substâncias nas células, como a clorofila, podem apresentar fluorescência após serem irradiadas por raios ultravioleta; Outras substâncias não podem apresentar fluorescência por si mesmas, mas podem apresentar fluorescência após serem tingidas com corantes fluorescentes ou anticorpos fluorescentes e irradiadas por raios ultravioleta. O microscópio de fluorescência é uma das ferramentas para pesquisas qualitativas e quantitativas sobre essas substâncias.
2, princípio do microscópio de fluorescência:
(a) Fonte de luz: A fonte de luz irradia luz de vários comprimentos de onda (do ultravioleta ao infravermelho).
(b) Fonte de luz do filtro de excitação: transmite luz com um comprimento de onda específico que pode tornar a amostra fluorescente, enquanto bloqueia a luz que é inútil para a fluorescência de excitação.
(c) Amostras fluorescentes: geralmente coradas com pigmentos fluorescentes.
(d) Filtro de bloqueio: bloqueando a luz de excitação não absorvida pela amostra para transmitir seletivamente a fluorescência, e alguns comprimentos de onda na fluorescência também são transmitidos seletivamente. Um microscópio que usa luz ultravioleta como fonte de luz para fazer o objeto irradiado emitir fluorescência. O microscópio eletrônico foi montado pela primeira vez por Knohl e Ha Roska em Berlim em 1931. Este microscópio usa um feixe de elétrons de alta velocidade em vez de um feixe de luz. Como o comprimento de onda do fluxo de elétrons é muito menor que o da onda de luz, a ampliação do microscópio eletrônico pode chegar a 800 mil vezes e o limite mínimo de resolução é de 0,2 nanômetros. O microscópio eletrônico de varredura, que começou a ser usado em 1963, pode fazer com que as pessoas vejam minúsculas estruturas na superfície dos objetos.
3. Âmbito de aplicação: usado para ampliar a imagem de pequenos objetos. Geralmente é aplicado à observação de biologia, medicina e partículas microscópicas.
Microscópio confocal
1. O microscópio confocal adiciona uma semi-lente semi-reflexiva no caminho óptico da luz refletida, que refrata a luz refletida que passou pela lente para outras direções. No seu foco, há um defletor com um furo, e o furo está localizado no foco. Atrás do defletor está um tubo fotomultiplicador. Pode-se imaginar que a luz refletida antes e depois do foco da luz de detecção passa por esse sistema confocal, e não será focada no pequeno orifício, mas será bloqueada pelo defletor. Assim, o fotômetro mede a intensidade da luz refletida no foco.
2. Princípio: O microscópio óptico tradicional utiliza a fonte de luz de campo, e a imagem de cada ponto da amostra sofrerá interferência da difração ou luz espalhada dos pontos adjacentes; O microscópio confocal de varredura a laser varre todos os pontos do plano focal na amostra usando a fonte de luz pontual formada pelo feixe de laser que passa pelo orifício de iluminação. O ponto irradiado na amostra é fotografado no orifício de detecção, que é recebido ponto por ponto ou linha por ponto pelo tubo fotomultiplicador (PMT) ou dispositivo acoplado a frio (cCCD) após a detecção do orifício, e uma imagem fluorescente é rapidamente formada em a tela do monitor do computador. O pinhole de iluminação e o pinhole de detecção são conjugados em relação ao plano focal da lente objetiva, e os pontos no plano focal focam no pinhole de iluminação e no pinhole de emissão ao mesmo tempo, e os pontos fora do plano focal não irão ser fotografado no pinhole de detecção, de modo que a imagem confocal obtida seja a seção transversal óptica da amostra, que supera o defeito de imagem borrada do microscópio comum.
3. Campos de aplicação: envolvendo medicina, pesquisa animal e vegetal, bioquímica, bacteriologia, biologia celular, tecidos e embriões, ciência alimentar, genética, farmacologia, fisiologia, óptica, patologia, botânica, neurociência, biologia marinha, ciência dos materiais, ciência eletrônica, mecânica, geologia do petróleo e mineralogia.
