Determinação do número de microrganismos - Método de contagem direta microscópica!
O crescimento da população bacteriana se manifesta por um aumento no número de células ou no material celular. Os métodos para determinação do número de células incluem contagem microscópica direta, contagem em placas, estimativa de turbidez por espectrofotômetro, número mais provável de MPN e filtração por membrana. (filtração por membrana) etc. Os métodos para medir substâncias celulares incluem a determinação do peso seco da célula, determinação de certos componentes celulares, como conteúdo de nitrogênio, conteúdo de RNA e DNA, e determinação de produtos metabólicos. Em suma, existem muitos métodos para medir o crescimento microbiano, cada um com as suas próprias vantagens e desvantagens. O método deve ser selecionado de acordo com os requisitos específicos do trabalho. Este experimento apresenta principalmente o método de contagem direta do microscópio que é comumente usado em trabalhos de produção e pesquisa científica.
1. Requisitos de finalidade
1. Esclareça o princípio da contagem com uma placa de contagem de células sanguíneas.
2. Dominar o método de contagem de microrganismos usando uma placa de contagem de células sanguíneas.
2. Princípios básicos
O método de contagem direta ao microscópio é um método simples, rápido e intuitivo que coloca uma pequena quantidade de suspensão da amostra a ser testada em uma lâmina especial com área e volume determinados (também chamado de bacteriômetro) e conta diretamente no microscópio. Métodos. Atualmente, os bacteriômetros comumente usados no país e no exterior incluem: hemocitômetro, bacteriômetro Peteroff-Hauser e bacteriômetro Hawksley, etc. Todos eles podem ser usados para contar leveduras, bactérias, esporos de fungos e outras suspensões, e os princípios básicos são os mesmos. Os dois últimos contadores bacterianos têm um volume total de 0.02mm3 depois de serem cobertos com uma lamínula, e a distância entre a lamínula e a lâmina é de apenas 0,02mm. Portanto, uma lente objetiva de imersão em óleo pode ser usada para observar e detectar células menores, como bactérias. contar. Além de usar esses bacteriômetros, existe também um método de estimativa que observa diretamente a relação entre a área do esfregaço e a área do campo visual ao microscópio. Este método é geralmente usado para exame bacteriológico do leite. As vantagens do método de contagem direta do microscópio são que ele é intuitivo, rápido e fácil de operar. No entanto, a desvantagem deste método é que o resultado medido é geralmente a soma de bactérias mortas e bactérias vivas. Atualmente, existem alguns métodos para superar essa deficiência, como a combinação de bactérias viáveis que mancham a cultura em microcâmaras (curto tempo) e a adição de inibidores de divisão celular para atingir o objetivo de contar apenas bactérias viáveis.
Este experimento usa um hemocitômetro como exemplo para realizar a contagem direta sob um microscópio. Para utilização dos outros dois bacteriômetros, consulte as instruções de cada fabricante. A contagem direta ao microscópio usando um hemocitômetro é um método de enumeração microbiana comumente usado. O tabuleiro de contagem é uma corrediça especial com quatro ranhuras formando três plataformas; a plataforma mais larga no meio é dividida em duas metades por uma ranhura horizontal curta, e há uma grade em cada lado da plataforma. Cada grade quadrada é dividida em nove quadrados grandes, e o quadrado grande no meio é a sala de contagem. A estrutura do quadro de contagem de células sanguíneas é mostrada na Figura {{0}}. Geralmente existem duas especificações para a escala da câmara de contagem. Um é um quadrado grande dividido em 25 quadrados médios, e cada quadrado médio é dividido em 16 quadrados pequenos (Figura 15-2); o outro é um grande quadrado. A grade quadrada é dividida em 16 quadrados médios e cada quadrado médio é dividido em 25 quadrados pequenos. No entanto, não importa que tipo de tabuleiro de contagem seja, existem 400 quadrados pequenos em cada quadrado grande. O comprimento lateral de cada quadrado grande é lmm, então a área de cada quadrado grande é lmm2. Depois que a lamínula é coberta, a altura entre a lamínula e a lâmina é de 0,lmm, então o volume da câmara de contagem é de 0,lmm3 (um décimo milésimo de mililitro). Figura 15-1 Estrutura do quadro de contagem de células sanguíneas (1) Figura 15-2 Estrutura do quadro de contagem de células sanguíneas (2) A. Vista frontal; B. Seção longitudinal; grade quadrada ampliada, o quadrado grande no meio é a câmara de contagem 1. Quadro de contagem de células sanguíneas; 2. Cobertura lamínula; 3. Ao contar na câmara de contagem, geralmente conte o número total de bactérias em cinco quadrados, depois encontre o valor médio de cada quadrado e multiplique por 25 ou 16 para obter O número total de bactérias em um quadrado grande é então convertido no número total de bactérias em 1ml de solução bacteriana. Suponha que o número total de bactérias nos cinco quadrados intermediários seja A e o fator de diluição da solução bacteriana seja B. Se for uma placa de contagem com 25 quadrados intermediários, então o número total de bactérias em 1mL da solução bacteriana {{ 23}} A/5×25×104× B=50000A·B (pedaços) Da mesma forma, se for um prato de contagem com 16 quadrados, o número total de bactérias em 1mL de solução bacteriana {{ 30}}A/5×16×104×B=32000A·B (peças),,
