Determinação da população microbiana – método de contagem microscópica direta!
I. Requisitos de Finalidade
1,Para esclarecer o princípio da contagem de placas de hematócrito.
2,Domine o método de contagem microbiana usando placa de hematócrito.
II. Princípios básicos
O método de contagem direta no microscópio é uma pequena quantidade de suspensão da amostra a ser testada em uma lâmina especial com área e volume definidos (também conhecido como contador bacteriológico), no microscópio a contagem direta é um método simples, rápido e intuitivo. Atualmente, os contadores bacteriológicos comumente usados nacionais e estrangeiros são: placa de contagem de células sanguíneas, contadores bacteriológicos Peteroff-Hauser e contadores bacteriológicos Hawksley, etc., que podem ser usados para leveduras, bactérias, esporos de fungos e outras suspensões de contagem, o princípio básico é o mesmo. Os dois últimos tipos de contadores têm um volume total de 0.02 mm3 após a colocação da lamela, e a distância entre a lamela e a fatia transportadora é de apenas 0,02 mm, portanto, células menores, como as bactérias podem ser observadas e contadas com uma objetiva de imersão em óleo. Além do uso desses contadores, existe também um método de estimativa da relação entre a área do esfregaço e a área do campo de visão observada diretamente ao microscópio, que geralmente é utilizado para exame bacteriológico do leite de vaca. As vantagens do método de contagem direta por microscópio são intuitivas, rápidas e fáceis de operar. Contudo, a desvantagem deste método é que o resultado geralmente é a soma de organismos vivos e mortos. Existem alguns métodos para superar esta desvantagem, como a combinação de cultura em microcâmaras coradas com bactérias vivas (curto tempo) e a adição de inibidores de citocinese para atingir o objetivo de contar apenas organismos vivos.
Etapas da operação
1, preparação de suspensão bacteriana
Use solução salina estéril para fazer suspensão bacteriana de levedura de cerveja com concentração adequada.
2,câmara de contagem de espelho
Antes de adicionar amostras, a câmara de contagem da placa de contagem deve ser inspecionada primeiro. Se houver alguma sujeira, ela precisa ser limpa e seca antes da contagem.
3,Adicionando amostras
Placa de contagem de células sanguíneas limpa e seca coberta com uma lamela e, em seguida, use uma bureta capilar estéril para agitar a suspensão de levedura de cerveja da borda da lamela para deixar cair uma pequena gota, de modo que o líquido bacteriano ao longo da lacuna por penetração capilar no câmara de contagem automaticamente, geralmente a câmara de contagem pode ser preenchida com líquido bacteriano. Ao colher amostras, a solução bacteriana deve ser bem agitada primeiro; ao adicionar amostras, a câmara de contagem não deve apresentar bolhas de ar.
4,contagem de microscópio
Depois de adicionar a amostra, deixe-a descansar por 5 minutos, depois coloque a placa de contagem de células sanguíneas no suporte do microscópio, primeiro encontre a localização da câmara de contagem com baixa ampliação e depois mude para alta ampliação para contagem. Ajuste a intensidade da luz do microscópio adequadamente, pois o microscópio com uma luz refletora também deve prestar atenção à luz não deve ser inclinada para um lado, caso contrário, o campo de visão não é fácil de limpar a linha da grade da câmara de contagem, ou veja apenas a linha vertical ou veja apenas a linha horizontal. Se o líquido bacteriano for muito espesso ou muito fino antes da contagem, é necessário reajustar a diluição antes da contagem. Os requisitos gerais de diluição da amostra de cerca de 5 a 10 bactérias em cada célula são apropriados. Para cada câmara de contagem, os organismos em 5 compartimentos intermediários (4 cantos e um compartimento intermediário no centro) são selecionados para contagem. Os organismos localizados nas linhas da grade são geralmente contados apenas nas linhas superior e direita. No caso da brotação de levedura, quando o corpo em brotamento atinge metade do tamanho da célula-mãe, é contado como dois organismos. Contar uma amostra das duas câmaras de contagem no valor médio para calcular o conteúdo bacteriano da amostra.
5. Limpeza da placa de hematócrito
Após o uso, enxágue a placa de contagem de células sanguíneas com água da torneira, não use objetos duros para lavar e escovar, seque sozinho ou use um secador de cabelo para secar após a lavagem. Inspecione microscopicamente a placa para ver se há algum organismo residual ou outros precipitados em cada compartimento. Caso não esteja limpo, a lavagem deve ser repetida até que esteja limpo.
