Métodos e etapas de depuração para microscopia de contraste de fase
um. Com base no ajuste do sistema de iluminação Kuhler, use o método de campo claro para focar claramente a amostra;
b. Gire o foco para Ph1 e alinhe-o com a linha de escala na plataforma giratória. Selecione uma objetiva de contraste de fase de 10 x e substitua-a pela amostra transparente a ser observada;
c. Remova uma das oculares, substitua-a por um telescópio centralizador e foque nos dois anéis de contraste no campo de visão (o anel de contraste preto da lente objetiva e o anel de contraste de transmitância da lente condensadora);
d. Os dois anéis de diferença no campo de visão podem não coincidir necessariamente. Ajuste os dois dispositivos de ajuste no refletor (ajustando as posições esquerda e direita dos anéis de diferença com hastes de ajuste e botões de fricção para ajustar as posições dianteira e traseira), de modo que o anel transparente se mova para frente e para trás para coincidir com o anel preto ;
e. Após o ajuste, volte para a ocular de observação e pressione o filtro verde no caminho óptico para observar a imagem de diferença de fase da amostra;
f. Ao observar com lentes objetivas de 20 x e 40 x, o foco deve ser colocado na posição Ph2, e ao usar uma lente objetiva de 100 x, o foco deve ser colocado na posição Ph3.
Âmbito de aplicação: Adequado para observar amostras transparentes, não coradas ou não coradas, como várias células, tecidos vivos, fatias de tecido não coradas ou não coradas, organismos aquáticos, etc.
O princípio básico do microscópio de contraste de fase
Quando a luz passa através de uma amostra relativamente transparente, não há mudança significativa no comprimento de onda (cor) e na amplitude (brilho) da luz. Portanto, ao observar amostras não coradas (como células vivas) sob um microscópio óptico normal, sua morfologia e estrutura interna são frequentemente difíceis de distinguir. No entanto, devido às diferenças no índice de refração e na espessura das diferentes partes da célula, haverá diferenças no caminho óptico da luz direta e difratada ao passar por esta amostra. À medida que o caminho óptico aumenta ou diminui, a fase das ondas de luz aceleradas ou atrasadas mudará (resultando em diferença de fase). A diferença de fase da luz não pode ser sentida a olho nu, mas o microscópio de diferença de fase pode usar seu dispositivo especial - uma abertura circular e uma placa de fase, e usar o fenômeno de interferência da luz para transformar a diferença de fase da luz em uma diferença de amplitude (diferença de claro e escuro) que pode ser detectada pelo olho humano. Isso faz com que o objeto originalmente transparente mostre diferenças óbvias de claro e escuro, aumenta o contraste e nos permite observar claramente células vivas e certas estruturas finas dentro das células que não podem ser vistas ou claramente vistas em microscópios ópticos comuns e microscópios de campo escuro.
O princípio de imagem de um microscópio de contraste de fase: a fonte óptica só pode passar através de um anel transparente de abertura circular, que é então focado em um feixe de luz. Quando esse feixe de luz passa pelo objeto que está sendo testado, ele sofre diversos graus de desvio (difração) devido aos diferentes caminhos ópticos de cada parte. Devido ao fato da imagem formada pelo anel transparente coincidir com a superfície conjugada da placa de fase e o plano focal atrás da lente objetiva. Portanto, a luz direta que não se desviou passa pela superfície conjugada, enquanto a luz difratada que se desviou passa pela superfície compensadora. Devido às diferentes propriedades da superfície conjugada e da superfície de compensação na placa de fase, elas irão gerar respectivamente uma certa diferença de fase e redução de intensidade da luz que passa por essas duas partes. Os dois conjuntos de luz irão então convergir através da lente traseira e viajar no mesmo caminho óptico, causando interferência entre a luz direta e difratada, transformando a diferença de fase em diferença de amplitude. Desta forma, durante a microscopia de contraste de fase, a diferença de fase que não pode ser distinguida pelo olho humano é convertida numa diferença de amplitude (diferença de brilho) que pode ser distinguida pelo olho humano através da luz de um corpo transparente incolor.
