Parâmetros Técnicos do Microscópio Confocal
1 resolução
A distribuição da função de dispersão do ponto do sistema do microscópio confocal é igual à convolução da lente objetiva e à distribuição de energia da imagem pontual. No caso da mesma objetiva, sua resolução lateral (plano xy) é 1,4 vezes maior que a dos microscópios ópticos tradicionais, chegando a 0.4λ/NA. Por exemplo, a resolução do TcS-NT da Leica é 0,18 μm. A partir do princípio do microscópio confocal, sabemos que a configuração do pinhole no detector não apenas suprime efetivamente a interferência da imagem do ponto fora de foco na imagem do plano de detecção, mas também suprime a interferência da não detecção ponto no plano de quase foco para o ponto de detecção, o que melhora muito a resolução da imagem. Além disso, para alcançar uma resolução extrema, os sistemas de microscópio confocal devem ser equipados com um estágio à prova de vibração.
2 Sensibilidade
Microscópios ópticos tradicionais são muitas vezes equipados com câmeras CCD para coletar imagens, mas devido à sensibilidade relativamente baixa dos CCDs, a luz de baixa iluminação, como a fluorescência, não pode ser detectada, então os tubos fotomultiplicadores são geralmente usados como elementos de detecção em sistemas de microscópio confocal. Muito mais do que o CCD, ele também pode mostrar alta sensibilidade a sinais fluorescentes fracos.
3 Resolução horizontal
Os sistemas de microscopia confocal revelam mais detalhes em imagens ampliadas do que a microscopia de luz convencional. A ampliação aqui mencionada não se refere à ampliação física, mas se refere aos detalhes morfológicos da imagem exibida pelo microscópio confocal na mesma condição de ampliação da lente objetiva, que é difícil de ver no microscópio óptico tradicional, portanto a imagem é mais claro e sutil. A resolução horizontal é maior.
4 Contraste
Como a luz de iluminação do objeto é apenas um ponto de luz focado muito pequeno na varredura, e o brilho e a relação sinal-ruído são altos, o sinal de luz é mais forte do que outros pontos do objeto. No plano da imagem, o detector pontual só pode receber a luz que passa pelo orifício, enquanto a luz difusa de outras partes do objeto é filtrada porque não pode ser focalizada no orifício confocal. Isso resulta em imagens de maior contraste de amostras obtidas com microscópios confocais de varredura do que com microscópios convencionais.
