Aplicação e uso dos princípios do microscópio de fluorescência
Princípios e características estruturais dos microscópios de fluorescência: Os microscópios de fluorescência usam uma fonte de luz pontual com alta eficiência luminosa para emitir luz de um determinado comprimento de onda (como luz ultravioleta de 3.650 pol. ou luz azul-púrpura de 4.200 pol.) através de um sistema de filtro de cor como luz de excitação para excitar a fluorescência na amostra. Depois que a substância emite fluorescência de várias cores, ela é então observada através da ampliação da lente objetiva e da ocular. Desta forma, sob um fundo forte e contrastante, mesmo que a fluorescência seja muito fraca, é fácil de identificar e tem alta sensibilidade. É usado principalmente para o estudo da estrutura e função celular, bem como da composição química. A estrutura básica de um microscópio de fluorescência é composta por um microscópio óptico comum mais alguns acessórios (como fonte de luz de fluorescência, filtro de excitação, divisor de feixe de duas cores, filtro de bloqueio, etc.). Fonte de luz fluorescente - geralmente usa uma lâmpada de mercúrio de ultra-alta pressão (50 a 200W), que pode emitir luz de vários comprimentos de onda, mas cada substância fluorescente tem um comprimento de onda de excitação que produz a fluorescência mais forte, portanto, um filtro de excitação (geralmente há filtros de excitação ultravioleta, roxo, azul e verde), que permitem apenas que a luz de excitação de um determinado comprimento de onda passe e ilumine a amostra, enquanto absorve todas as outras luzes. Depois que cada substância é irradiada pela luz de excitação, ela emite fluorescência visível com comprimento de onda maior que o comprimento de onda de irradiação em um tempo muito curto. A fluorescência é específica e geralmente mais fraca que a luz de excitação. Para observar fluorescência específica, é necessário um filtro de bloqueio (ou supressão) atrás da lente objetiva. Tem duas funções: uma é absorver e bloquear a entrada da luz de excitação na ocular para evitar perturbar a fluorescência e danificar os olhos; a outra é selecionar e permitir a passagem de fluorescência específica para mostrar uma cor de fluorescência específica. Os dois filtros devem ser selecionados e usados juntos.
