Vantagens e desvantagens da microscopia de varredura a laser multifóton (MLSM)
A microscopia de varredura a laser multifotônica é um método experimental baseado na tecnologia de microscopia de varredura a laser, que fornece melhores capacidades de corte óptico para observação tridimensional. O método de excitação de fluorescência multifótons usa luz vermelha de comprimento de onda longo ou luz infravermelha próxima para coletar imagens de fluorescência de alta resolução de espécimes, o que causa danos mínimos aos espécimes vivos. Portanto, é adequado para imagens de células vivas, especialmente tecidos vivos espessos, como fatias cerebrais, embriões, etc. Estudos de imagem de órgãos inteiros ou mesmo de corpos inteiros.
As vantagens são as seguintes:
1. Use luz vermelha ou infravermelha para excitar, e a dispersão da luz é pequena (a dispersão de pequenas partículas é inversamente proporcional à quarta potência do comprimento de onda).
2. Nenhum furo é necessário e mais fótons dispersos da seção transversal da imagem podem ser coletados.
3. O pinhole não consegue distinguir fótons dispersos emitidos da área desfocada ou da área de foco, e a relação sinal-ruído da imagem multifóton em camadas profundas é boa.
4. A luz ultravioleta ou visível usada para excitação de fóton único é facilmente absorvida e atenuada pela amostra antes que o feixe atinja o plano focal e é difícil de excitar camadas profundas.
5. Em termos de observação por microscópio biológico, a primeira consideração é não danificar o estado ativo do próprio organismo e manter o fluxo de água, concentração de íons, oxigênio e nutrientes. No caso da observação da luz, tanto a energia térmica quanto a dos fótons devem permanecer dentro da quantidade de irradiação e da energia luminosa para que as células não sejam danificadas.
6. A microscopia multifotônica também tem muitas vantagens. Por exemplo, em termos de resolução tridimensional, penetração em profundidade, eficiência de dispersão, luz de fundo, relação sinal-ruído, controle, etc., existem características transcendentes que os microscópios a laser anteriores não tinham ou não podiam igualar.
A microscopia confocal de varredura a laser multifótons foi estendida a vários campos de pesquisa e aplicação. Ele pode realizar observação tridimensional não destrutiva de amostras em seu estado natural e pode melhorar a resolução e a relação sinal-ruído do sistema. Usando materiais de excitação multifótons Mudanças nas propriedades também podem realizar armazenamento de dados de altura tridimensional e microusinagem tridimensional em qualquer direção, o que tem alto valor de aplicação. Acredita-se que com o desenvolvimento de máquinas, materiais, tecnologia laser, etc. relacionados à microscopia confocal multifóton, mais microscopia confocal fotônica de varredura a laser receberá maior desenvolvimento e aplicação mais ampla.
As desvantagens são as seguintes:
1. Ele só pode gerar imagens de fluorescência.
2. Se a amostra contiver cromóforos que possam absorver luz de excitação, como pigmentos, a amostra poderá ser danificada pelo calor.
3. A resolução é ligeiramente reduzida. Embora possa ser melhorado usando furos confocal ao mesmo tempo, haverá perda de sinal.
4. Limitado por lasers ultrarrápidos caros, o custo dos microscópios de varredura multifotônica é relativamente alto.
