Vantagens e Desvantagens da Microscopia de Varredura a Laser Multifotônica
A microscopia de varredura a laser multifotônica é um método experimental baseado na tecnologia de microscopia de varredura a laser, que fornece recursos de seccionamento óptico mais precisos na observação tridimensional. O método de excitação de fluorescência multifóton usa luz vermelha de comprimento de onda longo ou luz infravermelha próxima para coletar imagens de fluorescência de alta resolução de espécimes, que causa danos mínimos a espécimes vivos, por isso é adequado para imagens de células vivas, especialmente para tecidos vivos espessos, como fatias de cérebro, embriões, estudos de imagem de órgãos inteiros ou mesmo organismos inteiros.
As vantagens são as seguintes:
1. Excitado por luz vermelha ou luz infravermelha, a dispersão da luz é pequena (a dispersão de pequenas partículas é inversamente proporcional à quarta potência do comprimento de onda).
2. Não há necessidade de pinholes, e mais fótons dispersos da seção de imagens podem ser coletados.
3. O pinhole não consegue distinguir os fótons dispersos emitidos da área fora de foco ou da área de foco, e a relação sinal-ruído da imagem de múltiplos fótons em camadas profundas é boa.
4. A luz ultravioleta ou visível usada para excitação de fóton único é facilmente absorvida e atenuada pela amostra antes que o feixe atinja o plano focal, e não é fácil excitar camadas profundas.
5. Em termos de observação biológica ao microscópio, a primeira consideração é não danificar o estado ativo do próprio organismo e manter a circulação de água, concentração de íons, oxigênio e nutrientes. No caso da observação da luz, tanto a energia do calor quanto dos fótons devem permanecer dentro da quantidade de irradiação e da energia da luz que não danifica as células.
6. A microscopia multifóton também tem muitas vantagens. Como resolução tridimensional, penetração profunda, eficiência de dispersão, luz de fundo, relação sinal-ruído, controle, etc., existem características superiores que os microscópios a laser não possuem ou possuem incomparáveis no passado.
A microscopia confocal de varredura a laser multifotônica foi estendida a vários campos de pesquisa e aplicação. Ele pode realizar observações não destrutivas tridimensionais de amostras no estado natural e pode melhorar a resolução e a relação sinal-ruído do sistema. Usando materiais de excitação multifotônica, também pode realizar armazenamento de dados de altura tridimensional e microfabricação de direção arbitrária tridimensional, que tem alto valor de aplicação. Acredita-se que, com o desenvolvimento de máquinas, materiais e tecnologia laser relacionada à microscopia confocal multifóton, haverá mais microscópio confocal de varredura a laser de fótons, obterá maior desenvolvimento e aplicação mais ampla.
As desvantagens são as seguintes:
1. Somente para imagens de fluorescência.
2. Se a amostra incluir cromóforos que podem absorver luz de excitação, como pigmentos, a amostra pode ser danificada termicamente.
3. A resolução é ligeiramente reduzida. Embora possa ser melhorado usando a abertura confocal ao mesmo tempo, o sinal será perdido.
4. Devido à limitação de caros lasers ultrarrápidos, o custo do microscópio de varredura multifóton é relativamente alto.
