Vantagens e desvantagens da microscopia de varredura a laser
As vantagens são as seguintes:
1. Excitada pela luz vermelha ou infravermelha, a dispersão da luz é pequena (a dispersão de pequenas partículas é inversamente proporcional à quarta potência do comprimento de onda).
2. Não há necessidade de furos, capazes de coletar mais fótons dispersos da seção transversal da imagem.
3. Os furos não conseguem distinguir fótons dispersos emitidos de áreas desfocadas ou focais, e os multifótons têm melhor relação sinal-ruído em imagens profundas.
4. A luz ultravioleta ou visível usada para excitação de fóton único é facilmente absorvida e atenuada pela amostra antes que o feixe atinja o plano focal, dificultando a excitação de camadas profundas.
5. Em termos de observação por microscopia biológica, a primeira consideração é não danificar o estado ativo do próprio organismo e manter a circulação de água, concentração de íons, oxigênio e nutrientes. No campo da observação da luz, tanto a energia térmica quanto a dos fótons devem permanecer dentro da dose de irradiação e da energia luminosa que não danifique as células.
6. A microscopia multifotônica também tem muitas vantagens. Em termos de resolução tridimensional, invasão de profundidade, eficiência de espalhamento, luz de fundo, relação sinal-ruído, controle, etc., os microscópios a laser têm características incomparáveis ou superiores que os microscópios a laser anteriores não possuíam.
A microscopia confocal de varredura a laser multifotônica foi estendida a vários campos de pesquisa e aplicação. Ela pode realizar observações tridimensionais não destrutivas em amostras em seu estado natural e melhorar a resolução e a relação sinal-ruído do sistema. Ao utilizar as mudanças nas propriedades do material após a excitação multifóton, ele também pode alcançar armazenamento de dados de altura tridimensional e microprocessamento tridimensional em qualquer direção, que tem alto valor de aplicação. Pode-se acreditar que com o desenvolvimento adicional de mecânica, material , e tecnologias de laser relacionadas à microscopia confocal multifotônica, a microscopia confocal de varredura a laser multifotônica terá maior desenvolvimento e aplicações mais amplas
As desvantagens são as seguintes:
1. Somente para imagens de fluorescência.
2. Se a amostra incluir cromóforos que possam absorver luz de excitação, como pigmentos, a amostra poderá estar sujeita a danos térmicos.
3. A resolução é ligeiramente reduzida, embora possa ser melhorada utilizando simultaneamente pequenos orifícios confocais, haverá perda de sinal.
4. Devido às limitações dos caros lasers ultrarrápidos, o custo dos microscópios de varredura multifotônica é relativamente alto.
